基因操作技术在药物代谢酶系研究中的应用

采用基因敲除与转基因技术,可制备具有人类CYP450药物氧化代谢种属特性的“人源化”整体动物模型,在外源性化学物质与肿瘤发生的易感性研究等方面,具有重要的药理学和毒理学意义,也可为新药的研制与开发提供新的更为可靠的评价手段。     

雀舌黄杨的甾体生物碱

从昆明植物园载培的南方常见的园艺植物雀舌黄杨（Buxus bodinieri Levl.)中得到了5个新甾体生物碱成分雀舌黄杨碱A－E（1－5）,通过波谱解析确定了化学结构。     

当归对高脂血清所致ECV304细胞损伤的保护作用

实验观察了高脂血清对培养的人脐静脉内皮细胞（ECV304）的损伤及传统中药当归的保护作用,以探讨当归的抗动脉粥样硬化作用及其可能机制,培养人脐静脉内皮细胞,以高脂血清作损伤因子,用扫描电镜观察细胞的超微结构,分光光度法检测细胞培养液中一氧化氮（NO）的含量,免疫细胞化学方法检测细胞表面细胞间粘附分子－1（ICAM－1）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)及转化生长因子β1（TGFβ）的表达,与高脂血清孵育24h后,内皮细胞的超微结构明显收损,且细胞表面ICAM－1,bFGF的表达明显增加,而细胞培养液中NO的量及细胞表达TGFβ1明显减少,加入当归后,高脂血清对内皮细胞的这些作用均可被逆转,当归对内皮细胞中ICAM－1,bFGF,TGFβ及NO表达改变的影响可能与其抗动脉粥样硬化的作用有关。     

不同频率电刺激膈神经导致隔肌肌浆网Ca^2＋—ATPase和Ca^2＋释放—摄取动力学改变

研究不同频率慢性电刺激（CES）后兔膈肌肌浆网（SR）Ca^2 -ATPase活性以及SRC^2 摄取－释放动力学对不同频率CES的活应性变化,建立不同频率CES组,用定磷法测定SR Ca^2 -ATPaes活性,用Fura-2荧光法测定SR Ca^2 摄取－释放动力学,与对照组比较,慢性低频电刺激10Hz和20Hz组的SR Ca^2 －ATPase活性明显降低（P＜0．01）,Ca^2 释放－摄动力学也显著降低（P＜0．01）,慢性高频电刺激50Hz和100Hz组的SRCa^2 -ATPase活性则显著升高（P＜0．01）,Ca^2 释放－摄取动力学亦明显升高（P＜0．01）,实验提示,ECS后不同频率CES导致膈肌SRCa^2 -ATPase,Ca^2 摄取－释放动力学产生不同的适应性变化,对不同功能状态的膈应用不同频谱的慢性电刺激可能具有重要的临床意义。     

肾缺血增强大鼠延髓腹外侧头端区神经元电话动和Fos蛋白表达

在67只切断两侧缓冲神经的麻醉Sprague-Dawley大鼠,应用细胞外记录的电生理方法和免疫组织化学技术,分别观察肾缺血对延髓腹外侧头端区巨细胞旁外侧核神经元自发放电活动和Fos蛋白表达的影响.所得结果如下(1)左肾动脉阻断后,28个单位的放电频率由11.40±1.08增至21.1±1.74spikes/s(P<0.001),血压和心率无明显变化(P>0.05);(2)在17个放电单位中,应用腺苷受体拮抗剂8-苯茶碱(8-phenyltheophylline,10mg/kg)可明显抑制肾缺血的兴奋效应(P<0.05);(3)肾缺血后,延髓腹外侧头端区的Fos蛋白样免疫反应神经元显著增加(P<0.01);(4)预先应用8-苯茶碱可明显减弱肾缺血所激活的Fos蛋白表达反应(P<0.05).以上结果提示肾缺血增强延髓腹外侧头端区神经元的放电活动和Fos蛋白表达,而此作用可能与肾脏缺血所产生的腺苷激活肾内感受器有关.     

醛固酮对心室成纤维细胞分泌内皮素的影响

用细胞培养、内皮素放射免疫测定和RT-PCR的方法,探讨醛固酮对心室成纤维细胞分泌内皮素的影响。结果显示,醛固酮(1×10     

5—羟色胺抑制谷氨酸对海马神经元的毒性作用

为探讨5-羟色胺（5-HT）对过量谷氨酸（glutamate,Glu)神经毒性的影响。观察了5-HT存在时,过量Glu对海马细胞存活率、海马脑片CA1区群锋电位（population spike,PS)及神经细胞膜Ga^2 电流的影响。结果发现：5-HT可明显提高过量Glu作用下海马神经细胞的存活率,减缓Glu对海马脑片CA1区PS的降低作用;在细胞膜上,5-HT可明显减弱Glu诱导的Ca^2 内向电流,推测,一定浓度的5-HT具有抑制过量Glu神经毒性的作用。在细胞膜上5-HT可明显减弱Glu诱导的Ca^2 内向电流,推测,一定浓度的5-HT具有抑制过量Glu神经毒性的作用,其机制可能在于5-HT与细胞膜上特定的受体结合,抑制了Glu诱导的Ca^2 内流。     

颈动脉注射辣椒素对脑干心血管相关核团一氧化氮合酶和Fos表达的影响

实验采用NADPH－d组化技术和Fos蛋白免疫组化技术相结合的方法,观察了颈动脉注射辣椒不时,大鼠脑干心血管相关核团内NOS和Fos蛋白的分布以及两者的共存关系。结果显示：（1）颈动脉注射辣椒不可诱发脑干中最后区（AP）、孤束核（NTS）、巨细胞旁外侧核（PGL）和蓝斑（LC）等多个部位Fos样免疫反应（FLI)神经元显著增加 中脑中央灰质（PAG）和中缝核群（RN）的FLI神经元无明显改变。（2）PGL和NTS内NO合成神经元以及PGL内双标神经元数量也明显增加,而AG和RN中NO合成神经元无明显变化,在LC和AP仅偶见或未见NO合成神经元。（3）预先应用辣椒素受体阻断剂钌红或NMDA受体阻断剂MK－801,则明显减弱辣椒素的上述效应,以上结果表明,颈动脉注射辣椒素可兴奋脑干心血管活动相关核团神经元,NO在脑干核团对辣椒素的反应中发挥间接的调制作用,辣椒素的效应由香草酸受体（辣椒素受体）介导并有谷氨酸参与。     

肾缺血引起大鼠儿茶酚胺神经元Fos表达

实验应用Fos蛋白和酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）的双重免疫组化方法,观察肾脏动脉阻断（renal artery occlusion,RAO）是否激活脑干中核团的儿荷酚胺能神经元。所得结果如下：（1）脑干中Fos样蛋白的基础性表达低;RAO可诱发孤束核（nucleus tractus solitarius,NTS）、最后区（area postrema,AP）、巨细胞旁外侧核（paragi-gantocellularis lateralis,PGL）和蓝斑（locus coeruleus,LC）核团中许多神经元显示Fos样免疫反应（Fos-like immunoreactivi-ty,FLI）。（2）NTS、AP、PGL和LC核团中含有较多的儿茶酚胺能神经元;RAO能激活其中的部分儿荷酚胺能神经元。（3）腺苷受体阻断剂8－苯茶碱可明显减弱RAO所致的上述效应。以上结果表明,肾脏短暂缺血能激活脑干内的一些神经核团以及其中的部分儿荷酚胺能神经元。此效应可能是肾缺血时腺苷释放作用于肾内腺苷受体后引起肾传入神经活动增加的结果。     

家兔脑干呼吸相关结构向斜方体后的轴突投射—CB—HRP逆行示踪研究

实验在10只成年家兔上进行,斜方体后核（RTN）内微量注入霍乱毒素β亚单位耦合辣根过氧化酶（CB－HRP）后,在脑桥Koelliker-Fuse 核,臂旁内侧核及臂旁外侧核观察到大量HRP标记神经元,在延髓孤束核腹外侧区,疑核和后疑核,面神经后核的腹侧及内侧区观察到少数HRP标记神经元,在面神经后核,疑核及后疑核区域观察到大量HRP顺行标记末梢纤维,实验结果表明,RTN和脑桥及延髓的呼吸相关结构之间存在纤维联系。